4.2.4 盐酸羟胺溶液：10％。4.2.5 氨水溶液(1+1)。4.2.6 盐酸溶液(1+1)。4.2.7 盐酸溶液：0.1 mol／L。4.2.8 环己烷：经测定无荧光杂质，有必要时重蒸馏后使用。4.2.9 甲酚红指示剂：称取0.1 g甲酚红，加1滴50％氢氧化钠和10 mL水溶解，并稀释到50 mL。4.2.10 2，3一二氨基萘(DAN)溶液：在暗室中配制。称取0.1 g DAN，加0.1 mol／L盐酸溶液100 mL，振摇使其溶解。将溶液转入250 mL分液漏斗中，加20 mL环己烷，剧烈振摇5 min，静置分层后，弃去环己烷相。再加入20 mL环己烷，重复萃取三次，收集水相于100 mL棕色容量瓶，用水定容并覆盖一层环己烷，储存于冰箱中，每次临用前再用20 mL环己烷萃取一次。4.2.11 硒标准溶液：准确称取0.1000 g硒(纯度≥99.9％)，加5 mL硝酸，温热使其溶解；加水稀释到100 mL，此溶液每毫升相当于100 pg硒。4.2.12 硒标准工作液：吸取10.0 mL硒标准溶液置于100 mL容量瓶，以0.1 mol／L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，依次稀释到每毫升相当于0.1 pg硒。4.3 仪器和设备4.3.1 荧光分光光度计。4.3.2 凯氏烧瓶：250 mL。4.3.3 分液漏斗：125 mL，250 mL。4.3.4 电热恒温水浴锅。4.3.5 控温电炉。4.3.6 具塞三角烧瓶：100 mL。4.3.7 具塞刻度试管：5 mL。4.4 分析步骤4.4.1 样品前处理称取1.00 g样品置于250 mL凯氏烧瓶中，用少量水润湿样品，加入18 mL混合酸，在控温电炉上加热消化。应逐渐升高温度，消化至冒高氯酸白烟，保持1 min，此时溶液呈无色或浅黄色，即为消化终点(在消化过程中如出现炭化现象，需重新取样消化)。取下冷却，加20 mL水，继续加热至冒高氯酸白烟；取下稍冷，加l0 mL水，待冷却到室温，用20 mL～30 mL水将样液转入100 mL具塞三角烧瓶中，加0.19／6EDTA一2Na溶液2 mL。按样品操作步骤，同时做试剂空白及相应含量的硒标准。4.4.2 4，5一苯并苤硒脑络合物的形成在上述消化液中加入2滴甲酚红指示剂，以氨水溶液(1+1)和盐酸溶液(1+1)调节至溶液呈微橙红色。然后，加10％盐酸羟胺溶液1 mL，放置2 min，以下步骤需在暗室内进行。各加入DAN溶液2 mL，摇匀，置沸水浴中加热5 min，取出，冷却到室温。全部溶液转入125 mL分液漏斗中，加入5 mL环己烷，振摇萃取2 min，静置分层，放出下层水相，弃去。将环己烷层从分液漏斗上部倒入5 mL具塞试管中，并用环己烷定容至刻度。4.4.3 测定荧光分光光度计测定条件如下：激发波长380 nm，发射波长523 nm13.，狭缝10 nm，1 cm测量池。分别测定样液、试剂空白液和硒标准液中4，5一苯并苤硒脑络合物的荧光强度，与标准对照定量。4.5 结果计算按式(1)计算试样中硒的含量： 1  2  3  4  5