按样品操作步骤，同时做试剂空白及相应含量的硒标准。

4.4.2 4，5一苯并苤硒脑络合物的形成

在上述消化液中加入2滴甲酚红指示剂，以氨水溶液(1+1)和盐酸溶液(1+1)调节至溶液呈微橙红色。然后，加10％盐酸羟胺溶液1 mL，放置2 min，以下步骤需在暗室内进行。各加入DAN溶液2 mL，摇匀，置沸水浴中加热5 min，取出，冷却到室温。全部溶液转入125 mL分液漏斗中，加入5 mL环己烷，振摇萃取2 min，静置分层，放出下层水相，弃去。将环己烷层从分液漏斗上部倒入5 mL具塞试管中，并用环己烷定容至刻度。

4.4.3 测定

荧光分光光度计测定条件如下：激发波长380 nm，发射波长523 nm13.，狭缝10 nm，1 cm测量池。分别测定样液、试剂空白液和硒标准液中4，5一苯并苤硒脑络合物的荧光强度，与标准对照定量。

4.5 结果计算

按式(1)计算试样中硒的含量：

5 方法检出限

本方法检出限为0.01 mg／kg。

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