将处理的圆叶片冲洗干净吸干后于4℃下加入0.05mol/L磷酸缓冲液(pH7.8)研磨匀浆,10000r/min离心20min,上清液用721分光光度计测定光密度值,计算酶活性,以抑制氮兰四唑光化还原50%为一个酶单位〔4〕。 1.2.4MDA含量测定 取处理的圆叶加蒸馏水研磨匀浆,在提取液中加入0.5%硫代巴比妥酸溶液沸水浴中煮沸10min,3000r/min 离心15min,取上清液测532nm和600nm处的光密度,计算过氧化脂质含量〔5〕。
光照条件下5mg/L和1mg/L6-BA处理的油茶叶片的叶绿素含量分别为对照的115%和133%(经方差分析呈显著差异),暗条件下上述两种浓度的6-BA处理的叶片叶绿素含量分别为对照的106%和114%(附图),说明6-BA处理能维持较高的叶绿素含量,5mg/L6-BA处理的效果更佳,而且光照条件下有增益效应。 2.2 6-BA对油茶叶片蛋白质含量的影响 经过6-BA处理的油茶叶片蛋白质含量比对照的增加较多(附图),光照条件下以5mg/L和1mg/L6-BA处理的叶片蛋白质含量分别相当于对照的154%和120%,暗条件下上述两种浓度的6-BA处理的叶片蛋白质含量分别相当于对照的139%和118%,说明6-BA能有效地延缓叶片中蛋白质的降解从而延缓叶片衰老,也可以看出GA+6-BA混合液处理的叶片蛋白质含量与对照的无显著差异。 2.3 6-BA对油茶叶片SOD活性的影响 光照条件下以5mg/L和1mg/L6-BA处理的叶片SOD活性分别比对照的高29%和20%,暗条件下经上述两种浓度6-BA处理的叶片SOD活性分别比对照的高18%和13%,说明6-BA能维持叶片SOD活性较高水平,有效地防止叶片衰老.GA+6-BA混合液处理的叶片SOD活性与对照的也无明显差异(附图)。 2.4 6-BA对油茶叶片MDA含量的影响 光照条件下经5mg/L和1mg/L6-BA处理的叶片MDA含量分别比对照的低27%和14%,暗条件下经上述两种浓度6-BA处理的叶片MDA含量分别比对照的低的22%和11%,说明6-BA能抑制油茶叶片的膜脂过氧化作用。GA+6-BA混合液处理的叶片MDA含量与对照的也无明显差异(附图)。 3 结论与讨论 油茶叶片的光合色素、可溶性蛋白质含量、可以清除活性氧危害的SOD活性的降低和由于膜脂过氧化作用加强MDA含量增加而导致叶片衰老。以6-BA处理叶片可以明显影响这些生理过程。MDA的积累比对照少,SOD活性维持在较高水平,明显加强了细胞内清除自由基的能力,抑制膜脂的过氧化作用。Dhindsa等也发现激动素对燕麦叶片片段有防止MDA增加的作用〔6〕。可见细胞分裂素是通过影响蛋白质、类脂、色素等一系列代谢过程延缓叶片衰老的,以6-BA+GA混合液处理叶片对其生理过程无明显影响。 本试验结果,6-BA溶液的光照条件下处理叶片比暗条件下处理具有比较显著的效果,说明光对激素的作用有增益效应,表明以6-BA和GA等调节叶片衰老过程的效果可能因外界条件的差异而有所不同。 加入外源细胞分裂素可以延缓油茶叶片的衰老,延长光合器官的功能增加干物质,因此在林业生产实践上也具有参考价值。 参考文献
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2 华东师范大学生物系植物生理教研室主编.植物生理学实验指导.北京:人民教育出版社,1980.68~166
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5 朱广廉等编.植物生理学实验.北京:北京大学出版社1990.245~248
6 Dhindsa R S,Plumb-Dhindsa P L and D M Reis.Leaf senescence and lipid peroxidation:Effect of some phytohormones and scarengers of free redicals and singler oxygen.Plant Physiol,1982,56:453~457