茶树阶段性返白现象的研究—RuBP羧化酶与蛋白酶的变化*
发布时间 2012-05-09 浏览 42927 次

种植在杭州中国农业科学院茶叶研究所苗圃和浙江省安吉县林科所白茶基地的无性系安吉白茶茶苗。并采用种植于本所苗圃的安吉白茶部分实生绿苗作为可溶性蛋白组分分析的对照材料。
1.2 试验方法
1.2.1 叶片可溶性蛋白组分分析
1.2.1.1 叶片可溶性蛋白提取 白茶和对照样各500mg,液氮冻干。加3.5ml可溶性蛋白提取液(30mmol/L Tris-HCl,pH 8.7;1mmol/L DTT;1mmol/L EDTA;5mmol/L MgCl2)、0.1g水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及少量石英砂,冰浴研磨。4℃,8640r/min离心10min。取200μl,加1ml冷丙酮(内含10mmol/L巯基乙醇),摇匀后置于-20℃冰箱1h,用TGL-16离心机10000r/min离心5 min,收集沉淀,减压干燥,-20℃保存备用。
1.2.1.2 可溶性蛋白SDS-PAGE凝胶电泳〔8〕 浓缩胶浓度3%,分离胶浓度12%,含0.1%SDS。电泳后,凝胶用0.25%考马斯亮蓝R250、50%甲醇、10%乙酸固定染色6h,然后用7%乙酸和15%甲醇脱色。胶片用岛津CS-930薄层扫描仪595nm波长扫描。分子量测定用低分子量标准蛋白含兔磷酸化酶B(97400 u)、牛血清
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