茶树阶段性返白现象的研究—RuBP羧化酶与蛋白酶的变化*
发布时间 2012-05-09 浏览 42934 次
白蛋白(66200 u)、兔肌动蛋白(43000 u)、牛碳酸酐酶(31000 u),胰蛋白酶抑制剂(20100 u)和鸡蛋清溶菌酶(14400 u)。
1.2.1.3 可溶性蛋白含量、蛋白酶活性与游离氨基酸测定 可溶性蛋白含量测定采用考马斯亮蓝染料结合法〔6〕,在岛津UV-265分光光度计上测吸光值,并计算蛋白浓度。蛋白酶活性测定采用内源基质法〔7〕。游离氨基酸含量测定用国标法GB8312-87。
1.2.2 RuBP羧化酶提取及酶活力测定
1.2.2.1 RuBP羧化酶提取〔4,9〕 鲜叶去叶脉,液氮冷冻24h,再保存于-30℃冰柜待用。取10g上述保存的材料,加入80ml预冷的新鲜提取液(50mmol/L磷酸缓冲液,pH7.4,内含1mmol/L EDTA,5mmol/L巯基乙醇,10%甘油),及2g水不溶性PVP,预冷的组织捣碎机匀浆,快速5s,慢速5s,重复3次。然后经4层预冷纱布过滤,滤液经11900r/min离心20min,收集上清。
1.2.2.2 RuBP羧化酶活力测定 采用同位素方法测定。总体积为800μl的反应混合液含100μmol Tris-HCl缓冲液(pH7.8),10μmol MgCl2,8μmol NaH14CO2 (2μCi),2μmol DTT和100μl上述提
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