茶树阶段性返白现象的研究—RuBP羧化酶与蛋白酶的变化*
发布时间 2012-05-09 浏览 49823 次
取的RuBPcase酶液。25℃预温10min使酶活化,加入0.5μmol RuBP使反应开始。5min后,加入800μl HCl终止反应,90℃烘箱干燥。PACKARD 1900CA双道液体闪烁计数器测定,按以下公式计算酶活力:
U=DPM×3.997×60×V/(2.22×106×5×10-1)(CO2μmol.g-1.h-1FW)
式中:3.997为每微居里(μCi)14C相当于CO2的微摩尔数(μmol);60为分钟数(min);V为每克鲜重植物得到的酶液原液的体积(ml);2.22×106为每分钟内1μCi14C的蜕变数;5为反应时间(min);10-1为反应体积中酶液的体积(ml)。

2 结果与分析

2.1 叶片可溶性蛋白的电泳分析
叶片可溶性蛋白组分测定材料为本所苗圃3年生茶苗,自4月9日起每隔一周取样至5月16日叶片复绿时止。各时期样品电泳后进行比较,未能发现有明显的组分变化,仅发现有两条带的强度在不同时期有显著差异。将电泳胶片在薄层扫描仪上扫描后,其结果(图1)证实这两条带的含量在白化期与复绿后差异较大。根椐与低分子量标准蛋白质的对比计算,确定它们的分子量分别为54.2ku和14.9ku左右。经与菠菜RuBP羧化酶提纯品的多
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