用。取10g上述保存的材料，加入80ml预冷的新鲜提取液（50mmol／L磷酸缓冲液，pH7.4，内含1mmol／L EDTA，5mmol／L巯基乙醇，10%甘油)，及2g水不溶性PVP，预冷的组织捣碎机匀浆，快速5s，慢速5s，重复3次。然后经4层预冷纱布过滤，滤液经11900r／min离心20min，收集上清。1.2.2.2　RuBP羧化酶活力测定　采用同位素方法测定。总体积为800μl的反应混合液含100μmol Tris-HCl缓冲液(pH7.8)，10μmol MgCl2，8μmol NaH14CO2 (2μCi)，2μmol DTT和100μl上述提取的RuBPcase酶液。25℃预温10min使酶活化，加入0.5μmol RuBP使反应开始。5min后，加入800μl HCl终止反应,90℃烘箱干燥。PACKARD 1900CA双道液体闪烁计数器测定，按以下公式计算酶活力：

　　U=DPM×3.997×60×V／(2.22×106×5×10-1)(CO2μmol.g-1.h-1FW)式中：3.997为每微居里(μCi)14C相当于CO2的微摩尔数(μmol)；60为分钟数(min)；V为每克鲜重植物得到的酶液原液的体积(ml)；2.22×106为每分钟内1μCi14C的蜕变数；5为反应时间(min)；10-1为反应体积中酶液的体积(ml)。 2