2 糖苷酶的分离纯化及特征研究

糖苷酶是一类与茶叶醇系香气成份形成密切相关的酶类。为研究醇系香气成份的形成机理，有必要对糖苷酶进行分离纯化及特征的研究。茶叶中糖苷酶纯化，一般经过鲜叶匀浆制成丙酮粉、有机溶剂沉淀、（NH4）2ＳＯ4盐析、柱层析及FPLC等步骤［8，16］。β?葡萄糖苷酶与β－樱草糖苷酶纯化方法基本～致，只是条件略有不同。以β－樱草糖苷酶的分离纯化为例［16］。茶鲜叶匀浆制得的丙酮粉以0．1M pH6?0的柠檬酸盐缓冲液4℃悬浮3hr后17500g离心20min，取上清液加入等体积的丙酮搅拌过夜后35000g离心20min，弃上清液。将沉淀溶解后加入饱和硫酸铵溶液，35000g离心收集40～80％硫酸铵饱和度的沉淀，透析后过CMToyopearl 650M柱层析得Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ个组分，