含茯砖茶原料l.Og/mL浓度的提取液,放入高压蒸气灭菌锅中,经121.3C、20min高压灭菌后,冷却备用。(2)培养基和茯砖茶水提物的药敏纸片制备。牛肉膏汤、琼脂培养基及药敏纸片的制备均参考文献[7]。(3)试验菌活化培养、活菌计数和供试菌液的制备按参照文献[ 8-9]。(4)药敏纸片法抑菌试验。按参照文献[10]。(5)最低抑菌浓度(MIC)的测定。按参照文献[11]略作优化,将配置的固体培养基在121.30C、O.lMPa条件下灭菌20min,当灭菌培养基冷却至60。C左右时,在无菌条件下准确量取不同体积的茯砖茶提取液加入固体培养基中,配制成浓度lOOmg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.13mg/mL、1.56mg/mL和0.78mg/mL的茯砖茶水提取液浓度系列培养基,每个浓度做3个重复。不加茯砖茶提取物液的培养基为阴性对照。冷却凝固后,每平皿加入O.lmL的菌悬液,涂匀,将细菌置于37C下培养24h,观察生长情况以不长菌的最低提取物溶液浓度为该提取物的最低抑菌浓度。 (6)茯砖茶茶多酚及黄酮类化合物含量测定参考文献[12]。二、结果与分析1.六种细菌培养物菌落形